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EHS細胞-臨床醫(yī)學

EHS細胞-臨床醫(yī)學

產品目錄
詳細介紹

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經營范圍:國家標準物質、進口標準品、冶金標樣、標準氣體、藥典對照品、標準菌種、實驗室耗材、試劑盒

 

產品信息:EHS細胞-臨床醫(yī)學

標準名稱:EHS細胞-臨床醫(yī)學

產品簡介:

<1>細胞培養(yǎng)

  • 細胞請于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),大部分細胞是37℃,5% CO2,濕度100%環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細胞培養(yǎng)條件不*,請仔細閱讀相應的細胞說明書,使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件;
  • 細胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng),加入適量說明書上標注的細胞相應*培養(yǎng)基(一般液面高度2-3mm即可)。

<2>細胞傳代(以下步驟適用于10cm皿)

  • 細胞培養(yǎng)至密度達80%以上時即可傳代,先將細胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好,其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄;
  • 培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS,輕輕晃動皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍棄;
  • 加入1mL胰酶,輕輕晃動皿,使胰酶浸沒到皿底所有部位,將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化;

3min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞不再貼壁,即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻;

  • 若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止;
  • 將細胞懸液均勻分成幾份,分別加入不同培養(yǎng)皿中,補加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

<3>相關問題

  • 部分細胞在傳代后時,會有以下現(xiàn)象:細胞內會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細胞或者細胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時,可以咨詢本公司技術人員此現(xiàn)象是否正常及相關處理方式,不要頻繁換液,大多數(shù)細胞1周換液2-3次即可。
  • 細胞碎片較多、背景較臟時,貼壁細胞用PBS漂洗兩次、懸浮細胞打散后低速離心(900rpm,3min)能有效改善。
  • 傳代比例建議1:2-1:3,長得比較快的細胞可以1:3,比較慢的按1:2傳代。傳代后,建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基,會有大量細胞碎片甚至導致細胞死亡的風險。
  • 細胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時候,可以通過增加血清濃度調整細胞狀態(tài)及生長速度。
  • 請不要隨意更換培養(yǎng)基,因實驗需要,可以逐步馴化。

懸浮傳代:混勻細胞,收集細胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細胞,再離心后,用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。

  • 細胞凍存

<1>凍存操作

  • 凍存液配方:建議使用92%FBS+8%DMSO,客戶自身實驗室所使用的凍存液也可以適用,血清濃度不低于30%,DMSO含量不高于12%即可。
  • 收集細胞按照以上細胞傳代步驟操作至第④步后,將細胞懸液收集入15mL離心管,離心(1200rpm,3min);
  • 棄上清,加入配制好的凍存液,重懸細胞,懸液加入無菌凍存管中;
  • 將凍存管在4℃靜置10min,后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中,蓋緊盒蓋,放入-80℃冰箱過夜,第二天放入液氮即可長期保存。

<2>相關問題

  • 10cm皿的細胞長滿一般可以凍存2-3管,部分細胞長的比較慢,凍存的細胞密度要稍微大點,以防止復蘇后生長困難。
  • 凍存液中含的DMSO請使用細胞級DMSO,同時濃度不要太高。部分細胞在10%DMSO條件下凍存會死亡,所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度。
  • 細胞凍存及復蘇遵循慢凍快融的原則,即凍存時溫度不能急劇下降,應控制溫度緩慢下降。復蘇時應快速融化,融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
  • 凍存時建議設置凍存檢測,即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細胞于一個凍存管中,與正常體積凍存的細胞共同凍存,至液氮后復蘇檢查凍存結果。凍檢合格前,留一部分細胞繼續(xù)培養(yǎng),以防萬一。

另外,我們提供各種不同濃度的單標及混標定制服務,包含【十大系列】(真誠合作,誠招代理):

· 中藥對照品

· 分析滴定液

· 指示劑溶液

· 農殘類標準溶液

· 水質檢測標準溶液

· TOC/TIC標準液

· 原子吸收光譜儀標準液

· PH緩沖液(PH校正液@25℃)

· 比色計標準液(鉑鈷比色標準液)

· 離子層標準液(陰離子標準液、陽離子標準液)

 

公司簡介:

中國標準物質網隸屬于北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司,是國內最早的專業(yè)化標準物質信息平臺。創(chuàng)建以來,一直專注于標準物質的推廣與銷售,是多家知名標準物質研制單位和分析儀器公司的代理商,代理銷售國內外數(shù)萬種標準物質和標準樣品,同時經營各類精細化工產品及計量設備,業(yè)務遍及國內外眾多檢測機構、科研院校和工廠企業(yè),在業(yè)界具有較強的影響力

 

 

 

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